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发布时间:2022-03-10 11:52:00 作者:慧德易科技
抗l体的层析分离步骤基本
都可以采用标准化的三步曲:步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩;第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体,宿主蛋白等杂质;第三步是精纯去除剩余DNA,Endotoxin,Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中,步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上,也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因:首先是Protein A 价格昂贵,其价格是普通层析介质十几倍;第二,Protein A使用寿命短,一般离子交换填料使用寿命多达1000次,而亲和填料寿命通常在100-200次;第三,Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩,需要处理大体积的发酵液,而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析,使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此,要降低抗l体的生产成本,解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。
层析填料的分类
在把微细分散的固体或是附着于固体表面的液体作为固定相,把液体(与上述液体不相混合的)或气体作为移动相的系统中,使试料混合物中的各成分边保持向两相分布的平衡状态边移动,利用各成分对固定相亲和力不同所引起的移动速度差,将它们彼此分离开的定性与定量分析方法,称为层析,亦称色谱法。根据移动相种类的不同,分为液体层析、气体层析二种。
亲和层析
配体偶联在介质上,纯化能与配体结合的生物分子;通常一步便能得到高纯的样品;配体的特异性越强,所获产品纯度越高用亲和介质提纯单抗非常方便,以重组蛋白A的载量高;蛋白G则能结合更多不同源的IgG
金属鳌合介质(Chelating Sepharose Fast Flow)可反复鳌合不同金属,再用已结合依赖不同金属的蛋白,一种介质可做多种纯化工作
其他常用配体包括:肝素-纯化.酶III,凝血因子脂酶等Cibacron Blue(颜料)-纯化白蛋白,干扰素等外源凝集素如球蛋白A-多糖,糖蛋白等Glutathione谷胱甘三肽-重组融合蛋白等等.
可自行把所需配体偶联到活化偶联介质,的是NHS activated 4 Fast Flow和CNBr activated 4 FF;要注意化学基好不会参与配体和被纯化生物分子的结合作用中
TLC 层析技术
以下几点由高新科技为您给予,期待对行业的小伙伴有些协助。 薄层色谱法通称TLC,是在50年代从经典柱色谱法山石色谱法基本上发展壮大下去的一种色谱仪技术。六十年代后,大家对薄层色谱法的规范化、规范性及扩张运用等领域开展了很多工作中,使该方式 日趋完善。已经变成当代有机化学、纤维材料分离出来与分析的主要方式 。融合柱分离出来的薄层色谱技术可以具备完全的实操实际意义。
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