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发布时间:2021-12-02 03:07:00 作者:慧德易科技
液相色谱柱构造
色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成,压力不高于70 kg/cm2 时,也可采用厚壁玻璃或石英管,管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效,减小管壁效应,不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度,其效果与抛光相同。还有使用熔融硅或玻璃衬里的,用于细管柱。色谱柱两端的柱接头内装有筛板,是烧结不锈钢或钛合金,孔径0.2~20μm(5~10&μm),取决于填料粒度,目的是防止填料漏出。
液相色谱柱样品制备
1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外,如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。
2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成,会加速降低柱效。
3、色谱柱由高压匀浆法装填,能承受较高压力。为获得佳分离效果,使用时请不要超过200kgf,而且避免压力突然上升或变化,否则会造成硅胶填料的破坏,减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外高操作温度不要超过60℃。
色谱柱的清洗溶剂
下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序,作为参考:硅胶柱以正已烷(或庚烷)、和依次冲洗,然后再以相反顺序依次冲洗,所有溶剂都必须严格脱水。能洗去残留的强极性杂质,已烷使硅胶表面重新活化。反相柱以水、、、(或)依次冲洗,再以相反顺序依次冲洗。如果下一步分析用的流动相不含缓冲液,那么可以省略用水冲洗这一步。能洗去残留的非极性杂质,在()冲洗时重复注射100~200μl四氢数次有助于除去强疏水性杂质。四氢与或的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外,用、和三(0.1%)梯度洗脱能除去蛋白质污染。
阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗,阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗,除去交换性能强的盐,然后用水、、(除去吸附在固定相表面的有机物)、、水依次冲洗。
保存色谱柱时应将柱内充满或,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
色谱柱使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内,使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。
在后两种情况发生时,小心拧开柱接头,用洁净小钢将柱头填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取净)再把柱内填料整平。然后用适当溶剂湿润的固定相(与柱内相同)填满色谱柱,压平,再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善,但是很难恢复到新柱的水平。
液相色谱仪与气相色谱差别
液相色谱仪在基本概念上和气相色谱器是一致的,因此 设施的基本基本原理类似,可是它们在检查层面是有不一样的地点的,有不一样的,但又有不同点:液相色谱 与气相色谱的关键差别可归结为于以下几个方面:
1、气相方法的不一样:液相色谱仪只需将试样做成水溶液,而气相色谱需加温汽化或裂化;
2、流动相的不一样,在被测组分与流动相中间、流动各相稳定相中间都具有着一定的作用力;
3、因为溶液的黏度较汽体大2个量级,使被测组分在液态流动看中的热扩散系数比在汽体流动看中约小4~5个量级;
4、因为流动相的成分可开展普遍挑选,并可配备成二元或多元化管理体系,达到梯度方向过柱的必须,因此增强了液相色谱的屏幕分辨率(柱效率);
5、液相色谱选用5~10Lm细颗粒物固定不动相,使液体相在离子交换柱上透水性大大的变小,流动摩擦阻力扩大,务必依靠高压水泵运输流动相;
6、液相色谱仪是在液相中开展,对被测组分的检验,一般选用灵巧的湿式亮度检测器,比如,紫外线度检测器、示差折光率检测器 、莹光亮度检测器等;
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