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液相色谱柱构造

色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成，压力不高于70 kg/cm2 时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同。还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2~20μm（5~10&μm），取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。

液相色谱柱样品制备

1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。

2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。

3、色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。为获得佳分离效果，使用时请不要超过200kgf，而且避免压力突然上升或变化，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外高操作温度不要超过60℃。

色谱柱的清洗溶剂

下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序，作为参考：硅胶柱以正已烷（或庚烷）、和依次冲洗，然后再以相反顺序依次冲洗，所有溶剂都必须严格脱水。能洗去残留的强极性杂质，已烷使硅胶表面重新活化。反相柱以水、、、（或）依次冲洗，再以相反顺序依次冲洗。如果下一步分析用的流动相不含缓冲液，那么可以省略用水冲洗这一步。能洗去残留的非极性杂质，在（）冲洗时重复注射100~200μl四氢数次有助于除去强疏水性杂质。四氢与或的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外，用、和三（0.1%）梯度洗脱能除去蛋白质污染。

阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗，除去交换性能强的盐，然后用水、、（除去吸附在固定相表面的有机物）、、水依次冲洗。

保存色谱柱时应将柱内充满或，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。

色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。

在后两种情况发生时，小心拧开柱接头，用洁净小钢将柱头填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取净）再把柱内填料整平。然后用适当溶剂湿润的固定相（与柱内相同）填满色谱柱，压平，再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善，但是很难恢复到新柱的水平。

液相色谱仪与气相色谱差别 

液相色谱仪在基本概念上和气相色谱器是一致的，因此 设施的基本基本原理类似，可是它们在检查层面是有不一样的地点的，有不一样的，但又有不同点：液相色谱 与气相色谱的关键差别可归结为于以下几个方面：

1、气相方法的不一样：液相色谱仪只需将试样做成水溶液，而气相色谱需加温汽化或裂化；

2、流动相的不一样，在被测组分与流动相中间、流动各相稳定相中间都具有着一定的作用力；

3、因为溶液的黏度较汽体大2个量级，使被测组分在液态流动看中的热扩散系数比在汽体流动看中约小4~5个量级； 

4、因为流动相的成分可开展普遍挑选，并可配备成二元或多元化管理体系，达到梯度方向过柱的必须，因此增强了液相色谱的屏幕分辨率（柱效率）； 

5、液相色谱选用5~10Lm细颗粒物固定不动相，使液体相在离子交换柱上透水性大大的变小，流动摩擦阻力扩大，务必依靠高压水泵运输流动相； 

6、液相色谱仪是在液相中开展，对被测组分的检验，一般选用灵巧的湿式亮度检测器，比如，紫外线度检测器、示差折光率检测器 、莹光亮度检测器等；