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液相色谱法概述

液相色谱法自20世纪60年代问世以来，由于使用了高压输液泵、全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器，实现了对样品的高速、和高灵敏度的分离测定。液相色谱由于吸取了经典液相色谱的研制经验，并引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和分析精度。现在用微处理机控制的液相色谱仪，其自动化程度很高，既能控制仪器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了、功能齐全的分析工具。

液相色谱

GC与LC的比较

由于HPLC分析不受温度和样品沸点限制，因此具有更广阔的应用潜力。经过30多年的迅速发展，液相色谱法在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟，现已成为化学化工、环境、药学、食品等多个领域中具优势的分离分析方法之一。

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正确的液相色谱仪使用方法

随着实验方法的大量开发和成熟，目前液相色谱在包括食品、药品、化工、生命、环境等领域内大量使用，其作为一种通用分析检测设备在高校、科研院所、医院、监管机构、工厂企业中广泛配置。为了提高液相色谱仪的工作效率，延长液相色谱仪使用寿命，应该如何正确的使用液相色谱仪！

1．检查溶剂托盘托盘上的溶剂是否足量，以溶剂液面超过过输液管过滤头5厘米以上为宜。

2．检查输液管内部有否气泡，若有，应及时通过排液阀排出。

3．对溶剂（针对项看是否需要补充溶剂）和样品进行处理，过滤，脱气。

4．打开主机电源，依次打开检测器，泵A，泵B，柱箱的电源

5．打开电脑，开启色谱工作站

6．先在工作站中开启活塞泵，以所需的流动相平衡系统（约需30min）

7．打开灯，等待系统基线走稳

8．开始进样检测

液相色谱柱知识

物理性质：

柱长，内径，如250*4.6mm。一般柱长在2—250mm，柱越长，分离度越高，但柱压更高，分离所需时间更长；但分离度与理论塔板数的平方根成正比，所以一昧增加柱长并不是有效的分离手段，一般情况下，150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。

粒径，影响色谱分离度。粒径越小，分离越快，柱效越高，但柱压力越高，柱容易被污染，导致柱寿命降低。常见分析柱通常使用5um填料，复杂的多组分样品分离一般使用3.5um粒径，更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍，因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。本文来源于国内的第三方检测平台嘉峪检测网，提供检测实验、技术培训、仪器计量校准服务。

孔径，60A，120A，300A等。孔径小，则含孔率高，比表面积大，载碳量高；色谱柱填料孔径大小需和分子大小相匹配，保证分子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配，通常要求孔径直径是分子直径的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。

颗粒形状，一般有球形和不规则形，当使用黏度较大的流动相时，球形颗粒可以降低柱压，延长色谱柱寿命。

比表面积，指的是每克填料的表面积，如180m2/g—350m2/g，与粒度和含孔率有关；比表面积大，会增加样品与键合相之间的反应，增加保留和分离度；比表面积小则可以缩短分析时间和平衡时间，并不是比表面积大或者小就更好，需要选择合适的比表面积。