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液相色谱法概述

液相色谱根据分离机理的不同可分为：

?液固吸附色谱

?液液分配色谱

?离子交换色谱

?离子对色谱法

?分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)

(一)液-固吸附色谱

流动相为液体，固定相为固体吸附剂，根据物质吸附作用的不同来分离物质。

(二)液-液分配色谱

流动相和固定相都是液体的色谱法即为液-液色谱，是利用样品组分在两种不相溶的液相间的分配来进行分离。一种液相为流动相，另一种是涂于载体上的固定相。

流动相极性小于固定相极性的液-液色谱法称为正相分配色谱法。

流动相极性大于固定相极性的液-液色谱法称为反相分配色谱法。

(三)离子交换色谱

(四)离子对色谱法

(五)分子排阻色谱法

液相色谱

自动进样器

样品在进样前必须经过适当的预先处理，需要经过亚微米滤膜的过滤或者离心，防止样品中的微小颗粒堵塞管路，好使用流动相作为溶剂配制样品，所用溶剂应该对样品有较好的溶解性。

针座是喇叭口朝上暴露在空气中的，有时空气中的较大灰尘颗粒可能恰好落在针座的流路内而引起针座的堵塞。这时候可以尝试卸下针座，将它接在泵的出口上反冲，一般能解决问题。

如果经常使用缓冲溶液，除了泵头之外，ALS计量泵的柱塞及密封圈，六通阀的转子密封圈和定子密封圈应该定期清洗，防止有盐的颗粒磨损ALS一定要使用Agilent的样品瓶及瓶盖;使用不兼容的或者加工精度差的样品瓶及瓶盖会引起ALS故障率的增加及性能的降低。

液相色谱的基本原理

液相色谱基本原理是分离度(也叫分辨率)正比于

四分之理论塔板数n的平方根乘以

选择因子a比上a-1再乘以

分离因子k+1比上k

我认为分离度和这些变量是正比关系而不是准确的等于，如果非要说是等于的关系，再加上一个常数可能会更合理。

n和柱长(正比)、粒径(反比)、固定项填料(全多孔硅胶型，表面多孔/核壳型)有关

a和流动相种类(反向色谱：和)、pH(2到9)、柱温有关

分离因子/保留因子(平衡状态下，固定相中含量与流动相中的比值)和流动相种类、流动相比例、柱温、固定相填料有关

液相色谱HPLC是如何工作的？

在柱层析中，溶剂在重力作用下滴入装有吸附剂的色谱柱中。液相色谱是一种改进的柱色谱。在高达400个大气压的高压下，泵输送溶剂通过色谱柱。柱吸附剂或固定相通常是由固体颗粒（如二氧化硅或聚合物）制成的颗粒材料。

与柱色谱相比，利用泵输送，不仅可以快速分析，而且可以使用更小的颗粒作为柱填料。粒子越小，其表面积更大，通过固定相与流动相及样品组分之间的相互作用，可以更好地实现混合物中各组分分离。流动相通常是溶剂（如水、、）的混合物。

混合物的组分由于与吸收剂颗粒的相互作用的程度不同而彼此分离，在此过程中不同组分的洗脱速率不同，从而导致组分流出色谱柱时分离。与柱色谱相比，液相色谱自动化程度高，灵敏度高。