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液相色谱仪

洗脱系统：

分等度洗脱和梯度洗脱

等度洗脱：流动相比例保持不变

梯度洗脱系统：流动相比例随时间变化高压梯度洗脱系统低压梯度洗脱系统梯度洗脱主要是优化色谱条件，达到好的分离。

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四元低压梯度的混合比例是通过控制不同流路的电磁阀的开闭时间长短来控制的，理论上混合的比例也是准确的，但是实际上电磁阀的开闭会有一个延迟，无论它动作多么快，总还是需要一点时间的。比如A路和B路各50%混合，在单位时间内，A路和B路的电磁阀各开通50%的时间，这时问题不大，电磁阀的延迟影响可以通过调整补偿系数来尽量弥补。但是如果一点的情况，A路99%，B路1%，这种情况下单位时间内，A路的电磁阀开通99%的时间，B路只占1%，时间是很短的，这时B路电磁阀的延迟就影响很大了，甚至可能延迟的时间比工作的时间还要长，而高压梯度就不会存在这种问题。

液相色谱

HPLC对流动相的一般要求

流动相就比如人体的血液，其质量直接影响到整个系统的正常运行与否。

应该使用HPLC级的溶剂，不能互相混溶的溶剂不可以直接切换!一般在水相和与其不混溶的溶剂切换时，使用异作为过渡溶剂。

注意溶剂的截止波长。截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器中使用的低波长,低于该波长后,溶剂会有很强的紫外吸收，从而影响极限的稳定性、干扰对所分析物质的检测。

HPLC所使用的水必须是新鲜的和经过0.45μm滤膜过滤过的。建议每天更换新鲜的水。长期不用时，必须把使用水的管路用置换，防止长霉。

仪器使用完后要采用适当的溶剂冲洗等方法维护色谱柱和系统。如果使用了缓冲盐一定先将盐要冲洗干净。

仪器长期不用时，不建议使用纯封存。因为有生成聚合物的趋势。建议使用、/水或/水封存。

当有流路堵塞时，可以尝试将之反接后冲洗。污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命，并且影响泵和系统的的性能。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液(pH 4 至7) 中尤其如此。

液相色谱的主要部件有哪些？

液相色谱的部件按流动相流路的顺序：

流动相→真空脱气机(在线脱气装置)→泵(二元泵和四元泵：区分，有几种流动相按一定比例混合)→进样器(手动和自动)→柱温箱→检测器(紫外：朗伯-比尔定律，质谱：荷质比，荧光：跃迁，elsd：蒸发光)

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